Desarrollo y adaptación de la proteína E2 del subgenotipo viral 1e de la diarrea viral bovina (BVDV) en cultivo en suspensión. - Bonilla Acurio, Erick Esteban (2024)
La Diarrea Viral Bovina es una enfermedad con un impacto significativo en el sector ganadero. Los abortos espontáneos y los individuos persistentemente infectados son los mayores problemas asociados a esta enfermedad. Para el control de esta infección viral, se han utilizado con éxito vacunas con tecnología recombinante que generan inmunidad en el rebaño. La línea CHO-K1, se utilizó como hospedero para la obtención de la proteína E2 recombinante del subgenotipo viral 1e de la Diarrea Viral Bovina. El cultivo en condiciones adherentes genero la proteína E2 que se purificó por cromatografía de afinidad a iones metálicos a través de dos estrategias y una de las cuales logró una pureza de 50.46% y 7.6 µg/mL de rendimiento volumétrico con la adición de 500 mM de urea. El cultivo celular en condiciones adherentes se adaptó al crecimiento en suspensión en un biorreactor tipo spinner, a través de cambios de concentraciones crecientes de medio EX-CELL. Se purificó la proteína E2-1e por cromatografía de afinidad a iones metálicos en condiciones de suspensión, obteniendo 96.71% de pureza y 18.5 µg/mL de rendimiento volumétrico. Los resultados permitieron estudiar el perfil de glicosilación por separación en columna de fase normal y por cromatografía de intercambio iónico de los oligosacáridos derivatizados con 2-amino benzamida y se determinó la presencia de estructuras complejas mayormente sialiladas. La adaptación de células CHO E2-1e a condiciones de suspensión demostró ser beneficiosa para la producción de la proteína E2-1e, mejorando significativamente la pureza y el rendimiento volumétrico. Además, el estudio de los oligosacáridos anclados a la E2 es esencial para asegurar la consistencia y calidad en futuros procesos productivos como la generación de vacunas con antígenos recombinantes.