Identificación de fragmentos de anticuerpos que reconozcan el TNF-α en forma soluble.

El factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) es una citoquina proinflamatoria crucial en la regulación de la inflamación y en diversas enfermedades autoinmunes. La producción de TNF-α recombinante es esencial para evaluar la eficacia de sus inhibidores. Aunque se pueden usar sistemas eucariotas como células de insecto y mamíferos, E. coli se prefiere por su bajo costo y alta eficiencia en la producción de proteínas sin modificaciones postraduccionales complejas. La cepa E. coli SHuffle® T7 Express es particularmente adecuada para formar puentes disulfuro correctamente, produciendo proteínas solubles y funcionales. En este estudio, se logró expresar TNF-α recombinante en E. coli SHuffle® T7 Express optimizando los parámetros de expresión. Se estableció una concentración de IPTG de 0.5 mM y un tiempo de inducción de 5 horas. Esto permitió purificar TNF-α a una pureza del 92% mediante cromatografía de afinidad a iones metálicos, conservando una alta actividad biológica. La evaluación de la actividad en células L929 reveló una EC_50 de 2,32 pg/ml, indicando la notable potencia de la proteína recombinante. Además, se identificaron 6 nanobodies específicos contra TNF-α a partir de una biblioteca sintética de alta diversidad mediante un proceso riguroso de selección. Este enfoque permitió enriquecer la biblioteca con clones que se unían específicamente a TNF-α, destacando el gran potencial terapéutico de estos nanobodies. Este trabajo representa un avance significativo al combinar una producción optimizada de TNF-α con la identificación de nanobodies específicos, abriendo nuevas posibilidades para el desarrollo de terapias dirigidas contra TNF-α.

• Main Author: Emilia Carvajal, Flores (author)
• Format: bachelorThesis
• Published: 2024
• Subjects: TNF-α RECOMBINANTE; CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD A IONES METÁLICOS; E. COLI SHUFFLE® T7 EXPRESS; NANOBODIES; LIBRERÍA DE FAGOS
• Online Access: https://repositorio.espe.edu.ec/handle/21000/38914