Obtención de protoplastos del mesófilo de hojas de tomate (Solanum lycopersicum Mill.) mediante digestión enzimática - Castro Hinojosa, Christian Wladimir (2017)
El tomate (Solanum lycopersicum Mill.) es una planta alimenticia de amplio contenido nutricional, que ha adquirido gran importancia debido a su creciente demanda. La producción de este cultivo en el país es de las menores de Sudamérica y en ocasiones no satisface la demanda interna, haciendo notar la necesidad de mejorar los rendimientos de este cultivo. Una de las alternativas para ello es la obtención y cultivo de protoplastos, que pueden generar nuevos híbridos somáticos con alta capacidad de producción y multiplicación masiva. En esta tesis se presenta la estandarización de un protocolo de obtención de protoplastos del mesófilo de hojas de tomate, para su futuro uso en técnicas de fito-mejoramiento. El aislamiento consistió en realizar dos digestiones enzimáticas consecutivas en el tejido. Primero con una solución de pectinasa al 0.25% por tres horas y luego con una solución de celulasa al 0.25% y pectoliasa al 0.20% durante 15 horas. Se utilizó el medio de aislamiento I10 con manitol al 11%, hojas de 6-12 semanas de edad e incubación a 60 RPMs en oscuridad. El rendimiento final del aislamiento fue de 1.07x105 protoplastos/ml. La purificación se realizó centrifugando los protoplastos a 700RPMs por 5 minutos y realizando una flotación en una solución CPW- Sacarosa21%, obteniendo una viabilidad promedio del 81.30%. Finalmente las células fueron cultivadas en un medio TM2 con 0.5 mgL-1 de 2,4-D, 0.5 mgL-1 de Kin y 1mgL-1 de AIA, observándose las primeras divisiones celulares a partir del día 12 del cultivo con una eficiencia del 3.96%.