Estandarización y optimización de técnicas moleculares para la detección de Botrytis Cinerea, Ralstonia Solanacearum y CMV (Cucumber Mosaic Cucumovirus) en rubros agrícolas de interés para el INIAP - Buitrón Bustamante, Johanna Liseth (2012)
El objetivo principal de esta investigación fue estandarizar y optimizar técnicas de detección molecular para Botrytis cinerea, Ralstonia solanacearum y CMV que inciden en rubros agrícolas de interés para el Instituto Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias (INIAP). Las técnicas empleadas se basaron en la extracción de los ácidos nucleicos del patógeno y su detección mediante PCR y sus variantes. La detección de B. cinerea se realizó en plantas de mora de castilla y rosas, mediante una extracción de ADN a partir de aislamientos del hongo, seguido de una PCR empleando primers específicos reportados. La presencia del patógeno se determinó por la amplificación de un fragmento de 750 pb, observándose un límite de detección de 0,025 ng/µL de ADN del patógeno en la reacción. Sin embargo, el sistema no permitió la detección del hongo a partir de ADN genómico de plantas inoculadas y asintomáticas de mora de castilla. Para la detección de R. solanacearum, se realizó la extracción de ADN de la bacteria aislada a partir de plantas de musáceas muestreadas en la Amazonia, seguido de una PCR con primers específicos reportados. La presencia de la bacteria se determinó con la amplificación de un fragmento de 553 pb y se observó un límite de detección de 0,1 ng/µL de ADN. Para la detección de CMV, se realizó el diseño de primers específicos a partir de la secuencia que codifica para la proteína de la cápside del virus. Se detectó eficientemente la presencia del virus realizando reacciones de RT y Hemi-Nested PCR en plantas asintomáticas, ofreciendo al sector bananero una alternativa diagnóstica de la enfermedad. La estandarización y optimización de los métodos de detección de estos fitopatógenos constituyen una herramienta para el sector agrícola, debido a que estas técnicas demostraron que ofrecen grandes ventajas en cuanto a sensibilidad y especificidad.