Evaluación de marcadores moleculares para la discriminación de especies de Trichoderma spp. obtenidas de ecosistemas forestales. - González Mariscal, Dina Anabel (2022)
El objetivo del presente estudio fue evaluar los diferentes marcadores moleculares para la discriminación de especies de Trichoderma obtenidas de ecosistemas forestales, por lo que se tuvo que reactivar 43 cepas, luego extraer el micelio. Para el proceso de extracción de ADN se siguió el protocolo del kit de Wizard. Genomic DNA Purification (Promega Corporation), una vez obtenido el ADN se realizó los procesos de PCR tomando como base el protocolo de Zhou et al, 2021 que fue el siguiente: para ITrichF/ITrichR (ITS): 96°C por 1:30 minutos, 35 ciclos, 96°C por 35 segundos, 53°C por 55 segundos, 72°C por 1:30 minutos, 72 °C por 10 minutos. Los primers utilizados fueron: para la región ITS en género Trichoderma fueron ITricF/ITricR con un tamaño aproximado de los productos de PCR de 103 a 113 pb, para especie se utilizó el del gen TEF1, para T. harzianum los primers fueron EHarF2/EHarR2 y para Trichoderma longibrachiatum los primers utilizados fueron T1F/T1R con un tamaño aproximado de los productos de PCR de 253 pb y 452 pb respectivamente, luego se realizó las electroforesis. Se escogió 7 aislados para verificar si amplificaron según la especie estudiada y fueron enviados a MACROGEN COREA, se alinearon los resultados con la base de datos del Centro Nacional de Información Biotecnológica mediante la utilización del método BLAST. De las 43 cepas estudiadas se identificaron usando diferentes marcadores moleculares a 31 de estas dentro del género Trichoderma, para T. harzianum y T. longibrachiatum y se identificaron 17 y 12 cepas respectivamente. De las 7 muestras identificadas se obtuvo una cobertura 100% en su mayoría e identidad del 100% . Se concluye que los primers utilizados efectivamente funcionan para la discriminación de especies en Trichoderma. Se recomienda replicar este estudio utilizando los protocolos que mejor funcionaron en un número mayor de aislados.