Caracterización molecular de genes de resistencia a β-lactámicos en aislados clínicos de Escherichia coli provenientes de urocultivos y pruebas de inhibición con péptidos de Boana rosenbergi y Rana sp. - Díaz Escobar, Víctor Daniel (2017)
Escherichia coli productora de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) es un agente microbiano involucrado en la mayoría de infecciones del tracto urinario (85%), debido a las escasas alternativas terapéuticas disponibles y a su rápida adquisición de genes de resistencia a diversos antibióticos. El objetivo de este estudio fue caracterizar la presencia de alelos que confieren resistencia a antibióticos β-lactámicos en muestras clínicas de Escherichia coli provenientes de urocultivos y probar la eficacia de los péptidos de la piel de anuros de las especies Boana rosenbergi y Rana sp. sobre este patógeno. El estudio se realizó en 70 aislados de E. coli obtenidos de muestras de orina de pacientes de un hospital en Quito, identificados por matrix assisted laser disorption/ionization – time of flight mass spectrometry. El análisis de sensibilidad fue realizado en los Laboratorios Zurita & Zurita por VITEK® 2. Se extrajo ADN con el kit Wizard® Genomic DNA Purification para bacterias Gram-negativas. La amplificación de los genes blaCTX-M-1, blaCTX-M-15, blaSHV y blaTEM se realizó con primers específicos. La presencia o ausencia de estos genes fue analizada por electroforesis en gel de agarosa al 1%. Los productos de PCR con concentración de 10 ng/μl, se enviaron a MacroGen para su secuenciación. El análisis se realizó con el software Geneous versión 7.0. Finalmente, con 10 aislados de E. coli BLEE se realizó microdilución en caldo con las secreciones de B. rosenbergi y Rana sp. Como resultados se obtuvo que de los 70 aislados: 54/70 provienen de mujeres (77,1%) y 16/70 de hombres (22,9%), donde 46/70 (65,7%) se originaron de consulta externa y 39/70 (55,7%) tuvieron fenotipo BLEE positivo; 32/70 (45,7%) poseían el alelo CTX-M-15; 3/70 el gen blaSHV; 19/70 el gen blaTEM, estas sin fenotipo BLEE, resistentes a ampicilina y con los alelos TEM-1 (18/19) y TEM-214; En cuanto a los péptidos, no hubo inhibición bacteriana por las secreciones de B. rosenbergi. Para las secreciones de Rana sp. hubo inhibición bacteriana con concentración mínima inhibitoria (CMI) al 90 y 50% de las cepas de: CMI90 de 500 μg/ml y CMI50 de 250 μg/ml. Como conclusión se puede decir con seguridad que las secreciones de Rana sp. son un recurso disponible que puede ser explotado como alternativa para el tratamiento de E. coli resistente a β-lactámicos de amplio espectro.