Fertilización in-vitro con espermatozoides criopreservados de la especie Rhinella marina e identificación de malformaciones en los embriones obtenidos - Proaño Olmos, Belén Estefanía (2013)
El desarrollo de bancos de gametos es una herramienta útil para la conservación de especies amenazadas. La criopreservación de espermatozoides ha sido estandarizada en una variedad de organismos pero en anuros continúa en fase experimental, a pesar de los graves declives poblacionales que este grupo ha experimentado. Ecuador tiene un 28.8% de especies amenazadas, por lo que la elaboración de estos protocolos es urgente. En este estudio se criopreservaron los espermatozoides de Rhinella marina a -80°C, mediante un congelamiento paulatino y con tres concentraciones de Dimetil Sulfóxido (DMSO): 5%, 10% y 15%, como crioprotector. Una alícuota de cada tratamiento se descongeló después de una semana y, otra, luego de seis meses. Con la primera se realizaron fertilizaciones invitro y, con la segunda, se evaluó el estado de la membrana mediante tintes fluorescentes. Se encontraron daños en la membrana plasmática y reducción en el número de espermatozoides sometidos a congelamiento/descongelamiento. La concentración de DMSO al 10% protegió a una mayor cantidad de espermatozoides de la lisis celular. No se encontraron diferencias significativas en los porcentajes de fertilización entre las tres concentraciones de DMSO. La concentración de espermatozoides se mantiene constante sin importar el tiempo que permanezcan congelados, aunque no así su funcionalidad. Los embriones se mantuvieron hasta el estadio 21 para probar la toxicidad del DMSO. En todos los tratamientos, incluso en el control, se encontraron embriones con malformaciones, pero la solución de DMSO al 15% produjo un 2.33% más de individuos malformados que el control. Se recomienda realizar experimentos en los que se modifique la tasa de enfriamiento, pues así se incrementarían los porcentajes de fertilización.