Caracterización de cepas aisladas de Streptococcus Agalactiae remitidas al Instituto Nacional de Investigación en Salud Pública (INSPI) de la ciudad de Quito de octubre 2007 a marzo 2016 - Castrillón Calle, Valeria Fernanda (2016)
Streptococcus agalactiae es una bacteria colonizadora de tracto gastrointestinal, sin embargo, constituye un problema de salud pública en pacientes inmunocomprometidos, así como en neonatos e incluso en adultos no gestantes por las infecciones que causa. La identificación de este patógeno es crucial para los pacientes de riesgo como también para las mujeres gestantes en su último trimestre de embarazo por la transmisión vertical que podría ocasionar al neonato. A su vez, se requiere de una identificación adecuada de los perfiles de resistencia de esta bacteria para evitar la terapia antibiótica errónea o empírica lo que conllevaría a la aparición de nuevas resistencias bacterianas. Por este motivo el objetivo de esta investigación fue caracterizar las cepas de Streptococcus agalactiae remitidas al Instituto Nacional de Investigación en Salud Pública (INSPI) de la ciudad de Quito de octubre 2007 a marzo 2016. Este objetivo abarca el aporte de datos de estas cepas tanto en la caracterización fenotípica como genotípica. Además, determinar las resistencias a los antibióticos, conjuntamente con sus genes de resistencia. Para este estudio se incluyeron los aislados clínicos provenientes del cepario del área de: “Vigilancia de Resistencia a los Antimicrobianos” (RAM) del INSPI-Q dentro del cual existió un total de 103 cepas de Streptococcus agalactiae, 57 cumplieron con los criterios de inclusión propuestos en este estudio que fueron reactivadas en agar sangre de cordero. La identificación fenotípica de todos los aislados se realizó mediante pruebas como la observación microscópica, con tinción Gram, seguido de la prueba de catalasa, además de la observación de la hemólisis producida por las colonias en agar sangre de cordero, así como el test de CAMP y la prueba de susceptibilidad al disco de bacitracina. Mientras que, para la identificación genotípica de las cepas estudiadas, se extrajo el ADN mediante ebullición y se buscó, mediante la prueba de PCR, la amplificación de los genes cfb (codifica el factor CAMP), y el gen atr (gen housekeeping de Streptococcus agalactiae) los cuales fueron utilizados como marcadores moleculares de identificación de género y especie. Todas las cepas de este estudio fueron sometidas a pruebas de sensibilidad hacia penicilina, cefotaxima, levofloxacina, ciprofloxacina, eritromicina y clindamicina mediante el método de Kirby-Bauer, los halos de inhibición fueron interpretados de acuerdo a los puntos de corte presentados en el CLSI 2015. Las cepas que presentaron resistencia a macrólidos o lincosamidas se las sometió a la prueba de sensibilidad a antimicrobianos por un método automatizado (VITEK®-2Compact) para la determinación de la concentración mínima inhibitoria de los antibióticos eritromicina, clindamicina y quinupristina/dalfopristina. Por otro lado, el análisis molecular de las resistencias consistió en la extracción de ADN mediante ebullición, y la posterior amplificación de los genes ermA, ermB y lnuB. Se realizó la secuenciación del gen ermB para de esta manera evidenciar la presencia de sitios polimórficos a nivel de secuencia nucleotídica; para lograr esto se enviaron los amplicones purificados a la empresa Macrogen®.