Identificación de mutaciones en el exón 14 del gen F8 de presuntas portadoras de hemofilia A en tres ciudades del Ecuador, 2015

Introducción: La hemofilia A es uno de los trastornos hemorrágicos más comunes a nivel mundial. Aunque esta enfermedad está presente en el Ecuador, no se cuenta con datos estadísticos ni moleculares de posibles portadoras de la enfermedad. La hemofilia A se caracteriza por la presencia de hemorragias espontáneas o prolongadas debido a la deficiencia del factor de coagulación VIII, causada por mutaciones en el gen que lo codifica. Las mutaciones de mayor importancia son las inversiones de los intrones 1 o 22 aunque también se mencionan a las mutaciones puntuales que ocurren en varias regiones del gen F8. En particular, las mutaciones de mayor relevancia se encuentran en el exón 14, región más grande del gen. Objetivo: El objetivo del presente estudio fue identificar las principales mutaciones presentes en el exón 14 mediante secuenciación a partir de muestras provenientes de mujeres reconocidas como presuntas portadoras de hemofilia A de tres ciudades del Ecuador, 2015. Materiales y Métodos: En el presente estudio se incluyó veintitrés muestras de ADN de posibles portadoras de hemofilia A que fueron negativas para la presencia de las inversiones de los intrones 1 y 22. Las muestras de ADN fueron de tres ciudades, Quito (n = 13), Ambato (n = 6) y Guayaquil (n = 4). Para comprobar la viabilidad de las muestras se amplificó como control el gen parcial de la -globina humana. Por otro lado, se amplificó tres fragmentos del exón 14 para la detección de las mutaciones mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés). Los productos de PCR obtenidos fueron enviados a Macrogen para su purificación y secuenciación. Las secuencias obtenidas fueron editadas y limpiadas para obtener una secuencia consenso, la misma que se la comparó mediante BLAST con secuencias disponibles en el GenBank. Resultados: Todas las muestras de ADN de presuntas portadoras de hemofilia A amplificaron un producto de alrededor 100 pb que corresponden al gen parcial de la -globina humana. De las veintitrés muestras, veinte amplificaron para el fragmento A, diecisiete para el fragmento B y veintidós para el fragmento C del exón 14 con un producto de PCR de alrededor 1 200 pb, 600 pb y 1 000 pb, respectivamente. Todas las secuencias concesos de los tres fragmentos del exón 14 fueron similares en un 100% con la secuencia de referencia (número de acceso GenBank NG_011403.1), demostrando que no hay variaciones. Conclusión: De acuerdo a los resultados obtenidos, las muestras que amplificaron para los diferentes fragmentos del exón 14 de las presuntas portadoras de hemofilia A no presentaron mutaciones. Sin embargo, esto no descarta la condición de posibles portadoras debido a que pueden tener mutaciones en otras regiones del gen, influyendo en diferentes grados en la severidad de la enfermedad. Por otro lado, la ausencia de mutaciones puede deberse también a la presencia de otra enfermedad relacionada con la deficiencia del FVIII como es la enfermedad de von Willebrand. Por lo que es importante secuenciar todo el gen para dar un diagnóstico definitivo, así como realizar pruebas previas para descartar la presencia de la enfermedad de von Willebrand.

• Autor principal: Lema Hermosa, Jenny Marisol (author)
• Outros Autores: Risueño Benítez, Karla Alejandra (author)
• Formato: bachelorThesis
• Publicado em: 2016
• Assuntos: Hemofilia; mutación (biología); sangre - coagulación; exón 14; gen f8
• Acesso em linha: https://repositorio.puce.edu.ec/handle/123456789/28692