Optimización de un protocolo de extracción de ADN a partir de sangre bovina hemolizada y coagulada para la detección molecular de Anaplasma spp.

Para la detección molecular de Anaplasma spp. por PCR se requiere de la extracción de ADN eficiente a partir de sangre completa, lo que a su vez depende de la calidad de la muestra de sangre. La falta de capacitación en toma de muestra o su incorrecta conservación conllevan a la obtención de sangre hemolizada/coagulada. Esto dificulta la detección molecular del patógeno, limitando el alcance de una investigación. Para resolver el problema con este tipo de muestra, se adaptó un protocolo de Chelex-100 con modificaciones sobre el volumen de sangre y la purificación del ADN. Se extrajo ADN de 30 muestras de sangre bovina, hemolizada/coagulada, con el protocolo adaptado y dos kits comerciales de extracción de ADN. Se comparó la positividad por PCR de Anaplasma spp. en las muestras obtenidas, determinándose una buena concordancia de resultados entre los tres protocolos de extracción. Adicionalmente, se empleó el protocolo modificado para obtener ADN a partir de 109 muestras de sangre bovina hemolizada/coagulada. De estas, 64% fueron positivas por PCR para Anaplasma spp. El protocolo de Chelex-100 modificado es eficaz para la extracción de ADN a partir de sangre bovina, hemolizada y coagulada. El ADN obtenido con este protocolo permite la correcta detección molecular de Anaplasma spp. por PCR.

• Hlavní autor: Landázuri Rafael, Tomás Humberto (author)
• Médium: bachelorThesis
• Vydáno: 2020
• Témata: Ganado vacuno - enfermedades - ganado bovino; bacterias patógenas; adn; genética molecular; sangre - análisis
• On-line přístup: https://repositorio.puce.edu.ec/handle/123456789/20838