Embriogéneses somática y cultivo de protoplastos para la micropropagación de Handroanthus billbergii, Myroxylon peruiferum y Centrolobium, especies nativas del Bosque Seco del Litoral Ecuatoriano. - Escalante Alvarado, Rodolfo Vladimir (2014)
La micropropagación en especies forestales ha sido de mucha importancia por el impacto ambiental y económico que genera. En esta investigación se optaron dos técnicas: La Embriogénesis Somática y Cultivo de Protoplastos. Usando la técnica de Embriogénesis Somática se sembraron explantes de hojas en 22 tratamientos para la inducción de callos de primera generación obteniendo así que Centrolobium ochroxylum (Amarillo) mismo que, respondió en un tiempo aproximado de un mes en los medios que comprendían sales y vitaminas de Murashige y Skoog con una concentración de 15 o 25 mg.L-1. Se los indujo para la obtención de callos embriogénicos pero no hubo éxito en los tratamientos planteados. Myroxylon peruiferum (Bálsamo) reaccionó con el tratamiento que contenía cefatoxima con concentración 60 μg/mL y 5 mg.L-1 respectivamente de 2-4D y en los medios de cultivos que presentaban concentración de 1,12 mg.L-1 de BAP y 0,5 mg.L-1 de 2-4 D. Al inducir estos conjuntos celulares a formaciones embrionarias se obtuvo éxito en los medios que comprendían sales y vitaminas de Murashige and Skoog más 50 mg.L-1 de Glutamina, Caseína Hidrolizada a 50 mg.L-1 y con una concentración hormonal de 1 mg.L-1 de TDZ. En Handroanthus billbergii (Guayacán madera negro) se obtuvo callos de primera generación en los explantes de hojas cultivadas in vitro con una concentración hormonal de 1 mg.L-1 de BAP, de los cuales estos callos fueron sembrados en medios de cultivo que contenían las sales de Murashige y Skoog más las vitaminas de Gamborg B5 con una concentración hormonal de 1,12 viii mg.L-1 de BAP y 0,5 mg.L-1 de 2-4D para la generación de callos embrionarios. En el desarrollo de embriones somáticos se los cambio a un nuevo tratamiento que comprendía las sales de Murashige y Skoog más las vitaminas de Gamborg B5 complementado con Extracto de Malta a 400 mg.L-1 y Caseina Hidrolizada a 100 mg.L-1 y con una concentración hormonal de 2,21 mg.L-1 de BAP, 0,5 mg.L-1 de 2-4D e IBA a 1 mg.L-1. Además en Guayacán madera negro se obtuvo callos embriogénicos y embriones somáticos en el tratamiento que contenía concentración de 1 mg.L-1 de TDZ más las sales y vitaminas de Woody Plant Medium. Con la técnica de protoplastos se logró una buena obtención de células totipotenciales con una solución enzimática comprendida de Pectiolasa al 0,5 %, Celulasa con un 2,5 % y Macerozima al 0,5 %, más una solución osmótica basada en Cloruro de Calcio (CaCl) 100 mg.L-1, Fosfato de Sodio di hidratado (Na2HPO4 2H2O), 7300 mg.L-1, y 60 mL.L-1 de Buffer 7. Se ajustó a un pH 5,8. El desarrollo de las colonias celulares en las tres especies forestales se logró en los tratamientos que contenían sales de Murashige y Skoog más 1 mL.L-1 del energizante artificial (®V220) con una concentración hormonal de 1,12mg.L-1 de BAP y 0,5 mg.L-1 de 2-4D. El desarrollo de los microcallos se presentó al tercer mes aproximadamente en los medios de cultivo que contenían las sales y vitaminas de Woody Plant Medium con 1 mg.L-1 de TDZ.