IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS INVOLUCRADAS EN ESTRÉS BIÓTICO Y ABIÓTICO EN VARIEDADES COMERCIALES DEL FRÉJOL COMÚN (Phaseolus vulgaris) DE ECUADOR” - Ortega Maldonado, Karina Alexandra (2016)
El fréjol común (Phaseolus Vulgaris) es la leguminosa mas importante en todo el mundo para el consumo humano directo. Es originaria de Meso América (México). En Ecuador es una de las principales fuente de proteínas y carbohidratos para la población urbana y rural, especialmente para las familias de escasos recursos económicos, que no pueden acceder a la proteína de origen animal. Factores de estrés biótico y abiótico, representan los principales obstáculos que limitan la producción agrícola. Los principales problemas bióticos son las enfermedades causadas por hongos y bacterias, mientras que el principal problema abiótico identificado en Ecuador es la falta de agua o sequía. Las proteínas desempeñan un papel muy importante en la respuesta de las plantas al estrés ya que están directamente implicados en la formación del fenotipo final. En este trabajo hemos llevado a cabo la identificación de la diversidad de proteínas en frijol común, basada en estudios proteómicos que se centraron en la respuesta al estrés biótico y abiótico de las variedades seleccionadas. La necesidad de estudiar conjuntamente la presencia de las proteínas en la semilla y luego lograr identificarlas de tal manera que se pueda relacionar con la presencia de las proteínas comunes α-Amylase inhibitor β subunit, Phytohemaglutinin, Lectin. Y Phaseolin, las que están involucradas en la defensa (proteína PR) y las de respuesta al estrés (hifrofilinas, proteínas LEA, proteínas HSP, Execute 1 y 2, GCH, etc.) y de esta manera poder escoger variedades de P.vulgaris que puedan ser utilizadas en programas de mejoramiento genético. Luego de escoger las variedades de fréjol común, se siguió el protocolo de Bollini y col (1999) usando el Borato de Sodio como buffer para la extracción de proteínas del endospermo, se realizó electroforesis unidimensional a 9 variedades de P. vulgaris permitiendo confirmar la presencia de proteínas. Para la cuantificación de la proteína de los extractos se utilizó el método de Bradford, seguido de un enfoque isoeléctrico en tiras de 7 cm pH NL 3-10, en condiciones para la separación, que se basa en el desplazamiento de las moléculas en un gradiente de pH, en la segunda dimensión SDS-PAGE al 10%, se separaron y estudiaron las proteínas presentes en el endospermo de las semillas, obtenidas a partir de harinas de los granos. Y finalmente teñidos en comassie blue. La comparación de imágenes se lleva a cabo mediante software especializado, relacionando los resultados de este trabajo con el análisis de los geles, se identificará las variedades de P. vulgaris que presentan proteínas comunes y las relacionadas con el estrés biótico y abiótico. Variedades como INIAP 473 Boliche, INIAP 474 Doralisa, INIAP 482 Afroandino Y FRÉJOL DURO BLANCO se identificaron proteínas relacionadas al estrés como son las defensinas y las HSP10, mientras que en las otras variedades se identificaron mayormente las proteínas comunes: faseolinas y lectinas La calidad del análisis 2-DE se demostró con la selección de 40 puntos del gel para la identificación de proteínas y como patrón para el análisis de proteómica comparativa