Estandarización de un protocolo para la rápida detección del Gen Bla-KPC en Bacterias Gramnegativas resistentes a Carbapenémicos mediante el uso de LAMP (Loop Mediated Isothermal Amplification) - Alejandro Paspuezan, Ronny Ricardo (2019)
En Ecuador existe gran prevalencia de bacterias portadoras de enzimas carbapenemasas que representan el principal mecanismo de resistencia frente a los antibióticos betalactámicos, utilizados en el tratamiento de infecciones respiratorias, del sistema nervioso central, intraabdominales, urinarias, endocarditis y sepsis de origen no clasificado. El gen codificante para carbapenemasas, bla-KPC-2, es el de mayor incidencia en instituciones de salud del país, según reportes del INSPI – CZ9, Centro de Referencia Nacional de Resistencia a los Antimicrobianos (CNR-RAM). Actualmente hospitales o centros de salud básicos carecen de una técnica de amplificación de ácidos nucleicos de bajo costo, rápida detección, alta sensibilidad, especificidad y capacidad para discriminar secuencias de genes de resistencia. Mediante esta investigación se estandarizó un protocolo para la rápida detección del gen bla-KPC en Enterobacterias, usando LAMP como técnica de diagnóstico clínico que pueda ser utilizada a futuro en hospitales y centros de salud básicos. Se seleccionaron del cepario del CNR-RAM, 40 cepas bacterianas: 20 positivas para bla-KPC; 11 cepas con diferentes genes de resistencia a carbapenémicos (BLEE; bla-IMP; bla-NDM; bla-OXA-48, bla-Ctx-m) y 9 que no presentaban ningún gen de resistencia, todas confirmadas previamente mediante microbiología y biología molecular. Las condiciones de amplificación de la región del gen bla-KPC, que permitieron obtener un amplicón de buena calidad fueron: temperatura a 63 °C, concentraciones de oligonucleótidos internos: FIP/BIP 0.4μM; MgSO4 desde 4mM; Betaína a 0.8M; dNTPs a 0.8mM; volumen de ADN 1μL; tiempo de amplificación se estableció en 60 minutos a la temperatura indicada. LAMP presentó una alta sensibilidad y especificidad (>99%).