Evaluación de la genotoxicidad inducida por agentes mutagénicos mediante el ensayo cometa

Los agentes mutagénicos son los principales causantes de daños al ADN, precursores de mutaciones ocasionando errores en las funciones de la célula, por esta razón se busca estandarizar el protocolo modificado de ensayo cometa. Adicionalmente, se utilizan las enzimas de reparación FPG y ENDO III para identificar el tipo de daño oxidativo en la célula al ser inducidas por agentes como: peróxido de hidrógeno (H2O2), luz ultravioleta (UV) y bromato de potasio (KBrO3). El trabajo consiste en el aislamiento de linfocitos a partir de sangre periférica con el uso de un gradiente de densidad, Ficoll. Se realiza una lisis celular que permite la liberación del ADN, seguido de un proceso de alcalinización y una electroforesis de células individuales permitiendo la migración por carga del material genético. Posteriormente, se realiza una tinción con el colorante fluorescente de ADN, DAPI y se visualiza en un microscopio de fluorescencia con el filtro correspondiente, se identifica por medio de una lámpara de mercurio a una longitud de onda 590 nm la formación de una cola o cometa, con el propósito de evaluar el grado de daño existente en el ADN. Se emplean controles negativos, positivos y con tratamiento enzimático. Los valores registrados indican el porcentaje de daño existente en las células. Se analiza las imágenes en un software de calificación automático de los cometas. En el presente trabajo de investigación se evaluó el daño en el ADN causado por los diversos agentes mutagénicos mediante el uso de ensayo cometa en células mononucleares de sangre periférica humana. Dicha técnica es un método de alta sensibilidad y especificidad para el análisis de xenobióticos. Mediante el análisis de ensayo cometa con enzima FPG, los resultados demuestran que la inducción de daño al ADN a mutagénicos estudiados es principalmente de carácter oxidativo. Siendo el agente más dañino el bromato de potasio (KBrO3), seguido de la luz ultravioleta (UV) y el menor daño, el peróxido de hidrogeno (H2O2).

• Tác giả chính: Leoro Garzón, Thomas Alberto (author)
• Tác giả khác: Padilla Quizhpi, Pamela Virginia (author)
• Định dạng: bachelorThesis
• Ngôn ngữ: spa
• Được phát hành: 2023
• Những chủ đề: BOTECNOLOGÍA; BROMATO DE POTASIO; LUZ ULTRAVIOLETA; PERÓXIDO DE HIDRÓGENO
• Truy cập trực tuyến: http://dspace.ups.edu.ec/handle/123456789/25540