R?pida detecci?n e identificaci?n de infecci?n en pacientes somentidos a di?lisis peritoneal continua ambulatoria
- Authors
- Villacr?s Granda, Irina Maribel
- Format
- MasterThesis
- Status
- publishedVersion
- Description
Continuous ambulatory peritoneal dialysis (CAPD) is a category of peritoneal dialysis used for the treatment of chronic renal failure as an alternative to hemodialysis. Peritonitis is a common complication of CAPD technique. There are various routes of infection during peritoneal dialysis. Commonly Gram- positive bacteria are the source of infection followed by Gram-negative and fungal microorganisms. Laboratory methods used for diagnosing CAPD-associate peritonitis are based on culture of the dialysate by using enrichment media. In addition, some molecular methods as PCR or DNA microarrays are used for bacterial identification. MALDI-TOF- MS is a mass spectrometry technique that detects analytes and is used in clinical laboratories for the diagnosis of infections. Modifications to MALDI-TOF MS extraction protocols were made in order to use CAPD dialysate as an initial sample and develop a new protocol that can be used to rapid detection of infection in CAPD. The result showed that CAPD positive sample have a bacterial oncentration that is not high enough for the machine to read. Centrifugation protocols were used to concentrate bacteria in the dialysate samples. Maximum velocity of centrifugation for 20 minutes was the protocol that gave better results. Depending on the centrifuge used and the quantity of liquid in the assay, two different velocities were determined: 14,500 rpm in 1.5 ml and 4, 400 rpm in 25 ml. Different types of water were tested in order to determinate the difference between their use in washing steps. The highest scores value (2.305 and 2.303) were obtained in MALDI-TOF reading using deionized water in washing steps. Minimum concentration of bacteria was determinated using induced infections, a. Both Gram-positive and Gram- negative infections were estimated to have a threshold of 1 McFarland scale (3.0 x 10 6 CFU/mL). In addition, polymicrobial infections were induced in negative CAPD dialysate. The result showed that MALDI-TOF MS cannot determinate organisms that are in polymicrobial infections, only one microorganism was diagnoses in every assay. The obtained results showed that bacteria concentration in CAPD dialysate is not high enough to perform a direct extraction for diagnosis by MALDI-TOF MS. It is suggested that MALDI-TOF MS complements diagnosis by culture techniques and the study of other methods to concentrate bacteria in CAPD dialysate therefore a direct, rapid detection can be achieved.
La di?lisis peritoneal continua ambulatoria (CAPD) es un tipo de di?lisis peritoneal que es usada como alternativa para el tratamiento de fallo renal cr?nico en lugar de la hemodi?lisis. La peritonitis es una complicaci?n com?n de la t?cnica de CAPD. Existen varias rutas de infecci?n durante la di?lisis peritoneal. La fuente m?s com?n son las bacterias Gram positivas seguidas por Gram negativas y microrganismos f?ngicos. Los m?todos de laboratorio usados en el diagn?stico de peritonitis asociadas a CAPD son en base a m?todos de cultivo de la muestra mediante el uso de medios enriquecidos. Adem?s, algunos m?todos moleculares como PCR o ADN microarrays son utilizados para la identificaci?n de bacterias. MALDI-TOF MS es una t?cnica de espectrometr?a de masa que detecta analitos y es usada en laboratorios cl?nicos para el diagn?stico de infecciones. Se realiz? modificaciones a los protocolos de extracci?n del MALDI-TOF MS con el fin de desarrollar un protocolo que pueda ser usado en la detecci?n r?pida de infecciones en CAPD. Los resultados mostraron que las muestras positivas de CAPD no contienen la suficiente concentraci?n de bacteria para ser le?da por la m?quina. Algunos protocolos de centrifugaci?n fueron usados con el fin de concentrar la bacteria en las muestras. La centrifugaci?n por 20 minutos a m?xima velocidad fue el protocolo que mostr? los mejores resultados. Dependiendo de la centrifuga y la cantidad de l?quido utilizados en el ensayo, se determinaron dos velocidades: 14, 500 rpm EN 1.5 ml y 4, 400 rpm en 25 ml. Diferentes tipos de agua fueron probadas para determinar la diferencia entre su uso durante los pasos de lavado. Los valores m?s altos (2.305 y 2.303) fueron obtenidos en la lectura con MALDI-TOF mediante el uso de agua deionizada. La concentraci?n m?nima de bacteria fue determinada mediante el uso de infecciones inducidas con bacterias Gram-positivas y Gram negativas. Los dos tipo de infecci?n se mostraron una m?nima concentraic?n de 1 en la escala de McFarland (3.0 x 106 UFC/mL). Adem?s, se realiz? una preparaci?n de infecci?n polimicrobial mediante el uso de una muestra negativa de l?quido peritoneal. Los resultados mostraron que MALDI-TOF MS no puede determinar la presencia de todos los microorganismos presentes en una infecci?n polimicrobiana, ?nicamente detecta un microorganismo a la vez. Los resultados obtenidos demostraron que la concentraci?n de bacterias en una muestra de l?quido peritoneal de pacientes con CAPD no es suficiente para realizar una extracci?n directa y realizar una lectura en el MADI-TOF MS. Por lo tanto, se sugiere que el uso de MALDI-TOF MS sea complementario a un diagn?stico utilizando t?cnicas de cultivo y que el estudio de otros m?todos para concentrar bacteria en muestras de CAPD de tal manera que se pueda realizar una detecci?n r?pida de infecciones.
- Publication Year
- 2014
- Language
- eng
- Topic
- MICROBIOLOG?A
BIOLOG?A MOLECULAR
DI?LISIS PERITONEAL CONTINUA AMBULATORIA
EPIDEMIOLOG?A
- Repository
- Repositorio SENESCYT
- Rights
- openAccess
- License